NobleRyder NP-40裂解液
NobleRyder NP-40裂解液NobleRyder NP-40裂解液 即用型液體試劑 P4810-100ml
NobleRyder NP-40裂解液
產(chǎn)品簡介：
多種成分均可以從細胞中提取總蛋白，如 Triton、SDS、NP-40 等。NP-40 裂解液(NP-40 Lysis Buffer)是采用一種溫和的裂解方法獲得總蛋白的裂解液。所獲得的蛋白質(zhì)可以用于 PAGE 電泳、 Western、免疫沉淀(Immunol Precipitation ， IP)和免疫共沉淀(co-IP)等，并含有多種蛋白酶抑制劑成分，可有效抑制蛋白的降解，并維持原有的蛋白間相互作用。
NobleRyder NP-40 Lysis Buffer 主要由 Tris-HCl、NaCl、NP-40 以及 sodium pyropho-sphate，β-glycerophosphate，sodium fluoride, EDTA 等多種蛋白酶抑制劑組成。用NP-40 Lysis Buffer 得到的蛋白，可以用 BCA 蛋白定量試劑盒和 Bradford 蛋白定量試劑盒測定蛋白濃度。
產(chǎn)品組成：
編號 名稱 | P4810 | Storage |
NP-40 Lysis Buffer | 100ml | -20℃ |
PMSF(100mM) | 1.5ml | -20℃ |
使用說明書 | 1份 | |
操作步驟(僅供參考)：
(一)貼壁培養(yǎng)細胞
1、取 NP-40 Lysis Buffer 置于室溫溶解混勻，加入 PMSF，使 PMSF 終濃度為 1mM。
2、去除貼壁細胞的培養(yǎng)液，用 PBS、NS 或無血清培養(yǎng)液清洗 1 次，低速離心，棄上清，留取沉淀。
3、按照 6 孔板每孔加入 150～250μl 含有 PMSF 的裂解液的比例，加入 NP-40 Lysis Buffer。移液器輕輕吹打，使裂解液和細胞充分接觸。置于冰上或 4℃裂解 15～30min，通常裂解液作用于細胞 1～3s內(nèi)，細胞就會被裂解。
4、10000～12000g，4℃離心 5～10min(如無低溫離心機，室溫下離心亦可)，取上清。
5、進行后續(xù)的 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
(二)懸浮培養(yǎng)細胞
1、取 NP-40 Lysis Buffer 置于室溫溶解混勻，加入 PMSF，使 PMSF 終濃度為 1mM。低速離心懸浮細胞，棄上清，收集沉淀。
2、用手指輕彈細胞，使其松散。按照 6 孔板每孔細胞加入 150～200μl 含有 PMSF 的裂解液的比例，加入 NP-40 Lysis Buffer 。通常 6 孔板每孔細胞加入 150μl 裂解液已經(jīng)足夠，但如果細胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到 200～250μl。再用手指輕彈以充分裂解細胞，充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細胞沉淀。
3、10000～12000g，4℃離心 5～10min(如無低溫離心機，室溫下離心亦可)，取上清。
4、進行后續(xù)的 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
(三)組織樣本
1、取 NP-40 Lysis Buffer 置于室溫溶解混勻，加入 PMSF，使 PMSF 終濃度為 1mm。把組織jian切成細小的碎片，越小越好。
2、取在液氮或超低溫冰箱中冷凍 30min 以上的組織，迅速用液氮研磨，研磨過程盡量控
制在 1～2min 之內(nèi)，以減少蛋白的降解。
3、按照每 20mg 組織加入 150～250μl 裂解液的比例加入含有 PMSF 的裂解液。冰上或 4℃裂解 30～60min。
4、 步驟 3、4 亦可以采用如下過程：按照每 20mg 組織加入 150～250μl 裂解液的比例，加入含有 PMSF 的 NP-40 Lysis Buffer。用玻璃勻漿器或組織研磨器勻漿，直至充分裂解，該過程盡量控制在 1～2min 之內(nèi)，以減少蛋白的降解。
5、10000～12000g，4℃離心 5～15min(如無低溫離心機，室溫下離心亦可)，取上清。
6、進行后續(xù)的 PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
注意事項：
1、在貼壁培養(yǎng)細胞的操作步驟中，去除貼壁細胞的培養(yǎng)液后，如果血清中的蛋白沒有干擾，可以不用清洗。
2、如果裂解不充分可以適當(dāng)增加裂解液的用量，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量。
3、在培養(yǎng)細胞的裂解中，如果細胞量較多，必需分裝成 50～100 萬細胞/離心管，然后再裂解。大團的細胞較難裂解充分，而少量的細胞由于裂解液容易和細胞充分接觸，相對比較容易裂解充分。
4、 如果組織樣品本身非常細小，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解，通過強烈 Vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實驗。直接裂解的優(yōu)點是比較方便，不必使用勻漿器，缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
5、溶解 NobleRyder NP-40 Lysis Buffer 時，應(yīng)盡量縮短溶解時間，避免裂解液中的有效成分失效。
6、細胞裂解的操作步驟，應(yīng)置于冰上或 4℃進行。
7、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
有效期：12個月有效。
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